高效封閉劑-更高效的可防止放射性標(biāo)記探針與膜非特異性結(jié)合的封閉劑

第2章DNA分析69中的單拷貝序列，當(dāng)時(shí)的放射自顯影背景有許多雜點(diǎn)或雜帶(如)，在今天那樣的結(jié)果是不能發(fā)表的。

但是，幾年來各個(gè)領(lǐng)域取得的顯著進(jìn)步提高了雜交的靈敏度及重復(fù)性，現(xiàn)在我們通常都可以獲得完美的雜交結(jié)果。最為重要的改進(jìn)是使用了比硝酸纖維素膜更耐用、結(jié)合能力更強(qiáng)的尼龍膜作為固相支持物。

另外，DNA現(xiàn)在經(jīng)過轉(zhuǎn)移后共價(jià)結(jié)合于膜上，避免了由于高溫處理硝酸纖維素膜時(shí)DNA被洗脫而引起的問題(Haas )。其他的進(jìn)步還包括：

●多種更有效的從膠上轉(zhuǎn)移DNA到膜上的方法，如向下毛細(xì)管轉(zhuǎn)移(Lichtenstein ; Chomczynski 1992)、真空印跡(Medveczky et ; Olszewska and Jones1988; Tmovsky 1992)雙向印跡(請見方案9)、堿性緩沖液中轉(zhuǎn)移( Reed and Mann1985)。

●簡潔的體外標(biāo)記，可獲得更高特異性的探針(Feinberg and Vogelstein 1983，1984)。

●更高效的可防止放射性標(biāo)記探針與膜非特異性結(jié)合的封閉劑(ChurchandGilbert1984)。

●使用高敏感度的感光影像儀高效顯像。這些改進(jìn)方法在“如何將DNA從膠上轉(zhuǎn)移到膜上”的方案11和方案12可見。放射性標(biāo)記探針與固定化DNA雜交的方案見方案13.以上技術(shù)方案適用于經(jīng)限制性內(nèi)切核酸酶消化后的哺乳類動物基因組DNA的Southerm分析，